中醫(yī)界運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)方法進(jìn)行相關(guān)研究已有多年歷史，在病證動(dòng)物模型上頗有收獲。對(duì)脾虛證動(dòng)物模型發(fā)展歷程進(jìn)行回顧，對(duì)動(dòng)物選擇、造模方法、評(píng)價(jià)指標(biāo)、消化系統(tǒng)病證結(jié)合模型進(jìn)行總結(jié)和評(píng)論。模型動(dòng)物多選用以大鼠為代表的小型嚙齒類。目前，多基于病因病機(jī)造模，而較少使用化學(xué)藥物與物理因素造模，復(fù)合因素造模法最常見。評(píng)價(jià)指標(biāo)則分為中醫(yī)證型指標(biāo)、與“脾”功能和特性有關(guān)量化指標(biāo)，以及方劑反證。功能性腹瀉/消化不良為代表的脾虛證病證結(jié)合模型是目前研究的重心。脾虛證動(dòng)物模型研究成績斐然的同時(shí)仍存在許多不足，如缺乏脾虛證模型行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和共識(shí)，評(píng)價(jià)指標(biāo)缺乏系統(tǒng)性和整體性，脾虛理論的現(xiàn)代闡釋缺乏統(tǒng)一，學(xué)界亟需解決上述問題以促進(jìn)發(fā)展。
病因病機(jī)造模
脾虛證多因饑飽失?；蜻^食肥甘厚味生冷，或勞倦過度，或思慮過度、情志失調(diào)，或吐瀉日久、損傷脾土，或濕邪侵襲、內(nèi)困脾土，或稟賦不足、素體脾胃虛弱，或久病調(diào)養(yǎng)失慎，或他臟病變及脾，或過服苦寒及攻伐藥物等致脾胃氣血陽陰受到損傷所致。
根據(jù)中醫(yī)理論造模更符合臨床情況，具有中醫(yī)特色，因此應(yīng)用最為廣泛。造模方法如下：
(1) 苦寒瀉下法：根據(jù)苦寒瀉下之劑易傷脾胃的病機(jī)，采用番瀉葉煎劑、生大黃煎劑、小承氣湯煎劑等苦寒瀉下劑灌飼實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
(2) 耗氣破氣法：有學(xué)者以耗氣破氣為造模因素，根據(jù)脾虛忌下，降泄藥物易耗氣破氣，采用厚樸三物湯等耗氣破氣之方劑。亦有學(xué)者認(rèn)為此法仍屬苦寒瀉下法的范疇。
(3) 飲食失節(jié)法：飲食失節(jié)，則脾胃乃傷。采用禁食與暴飲暴食交替實(shí)施，或給予限量飲食，或高脂、高乳糖飼料飼養(yǎng)，或灌胃厚膩豬油等。
(4) 飲食偏嗜法：灌胃酸味的食醋，或苦味的黃連、杏仁水煎劑，或酒醋結(jié)合，或給予辛溫燥熱的混合飼料等。
(5) 勞倦過度法：根據(jù)“勞則氣耗”的病機(jī)，采用振蕩器長時(shí)間振蕩，或跑步機(jī)跑步，或強(qiáng)制游泳法，或小平臺(tái)站立法。
化學(xué)藥物與物理因素造模
有學(xué)者根據(jù)臨床上運(yùn)用化學(xué)藥物或放射療法治療的副作用類似脾虛證癥狀來造模，這類方法具有操作簡單、成模迅速、癥狀明顯的優(yōu)點(diǎn)，但因機(jī)制單一，不符合脾虛證復(fù)雜且緩慢的病理過程，在研究中應(yīng)用較少。造模方法如下：
(1) 利血平注射法：脾虛患者常見交感神經(jīng)抑制，副交感神經(jīng)偏亢的癥狀，利血平消耗兒茶酚胺的作用使副交感神經(jīng)興奮，與脾虛癥狀相似。
(2) 秋水仙堿法：長期使用秋水仙堿導(dǎo)致消化吸收不良、肌無力等副作用，與中醫(yī)脾氣虛證密切相關(guān)。
(3) X射線照射法：放射治療所致副作用臨床表現(xiàn)以中醫(yī)脾虛、氣虛為主。基于此現(xiàn)象通過X射線照射大鼠腹部塑造慢性脾氣虛模型。
復(fù)合因素法造模
即采用上述兩種及以上方法來造模，使動(dòng)物模型更加符合臨床的復(fù)雜病情，是目前主流的造模方法。如飲食失節(jié)法+勞倦過度法，可使用隔日禁食+小平臺(tái)站立；苦寒瀉下法+飲食偏嗜法，可使用灌胃大黃煎劑+乙醇灌胃；飲食失節(jié)法+勞倦過度法+苦寒瀉下法，可使用豬油甘藍(lán)飼喂+強(qiáng)制游泳+灌胃番瀉葉煎劑。
消化系統(tǒng)疾病的脾虛證候的病證結(jié)合模型研究
如今中醫(yī)病證同重，中醫(yī)脾胃理論與現(xiàn)代消化系統(tǒng)疾病關(guān)系密切，脾虛證模型日臻成熟，學(xué)界將重心轉(zhuǎn)移到消化系統(tǒng)疾病脾虛證病證結(jié)合模型研究，常見疾病有功能性腹瀉、功能性消化不良、便秘、胃潰瘍、潰瘍性結(jié)腸炎等，其中功能性腹瀉和功能性消化不良發(fā)病中脾虛證占據(jù)絕大部分。病證結(jié)合模型造模思路較為統(tǒng)一，即選取公認(rèn)的疾病造模方式結(jié)合上述基于病因病機(jī)的脾虛證造模方法。消化系統(tǒng)疾病癥狀與脾虛證癥狀多有重疊，還應(yīng)關(guān)注模型動(dòng)物非重疊癥狀以明確病和證均得到復(fù)刻。
功能性腹瀉脾虛證模型
用高乳糖飼料結(jié)合水平臺(tái)站立法建立功能性腹瀉脾虛證模型，對(duì)模型不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)的各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行觀測，綜合評(píng)價(jià)模型，并灌胃四君子湯反證其模型。用同樣方法建立功能性腹瀉脾虛證大鼠模型，發(fā)現(xiàn)腸道黏膜微絨毛形態(tài)微觀結(jié)構(gòu)的改變，結(jié)腸黏膜組織中的水通道蛋白4(AQP4）、水通道蛋白8(AQP8）的表達(dá)水平降低，水分吸收減少可能是導(dǎo)致腹瀉的原因。
功能性消化不良脾虛證模型
有研究采用碘乙酰胺灌胃疊加水平臺(tái)站立法建立功能性消化不良脾虛證模型大鼠，發(fā)現(xiàn)大鼠抓力、胃排空率明顯降低，促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（Corticotropin Releasing Factor，CRF）和尿皮質(zhì)素2（Urocortin 2，UCN2）表達(dá)明顯降低，胃組織線粒體呼吸鏈復(fù)合物IV亞單位（Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅣA，COX VA）蛋白和m RNA表達(dá)降低，能量代謝受損；胃體組織Ca2+/鈣調(diào)蛋白（Calmodulin，Ca M）、肌球蛋白輕鏈激酶（Myosin Light Chain Kinase，MLCK）、肌球蛋白輕鏈（Myosin Light Chain，MLC）蛋白及基因的表達(dá)降低，胃動(dòng)力，胃體、胃竇平滑肌肌條收縮力和收縮周期頻率紊亂；胃組織蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（Protein Kinase R-like Endoplasmic Reticulum Kinase，PERK）蛋白表達(dá)增加，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmic Reticulum Stress，ERS）加強(qiáng)；小腸組織葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白1（Glucose Transporter 1，GLUT1）蛋白與m RNA表達(dá)降低，葡萄糖吸收能力降低。
便秘脾虛證模型
脾虛型便秘多用KM小鼠，采用“番瀉葉灌胃+控制飲食、饑飽失常法”造模。先用純番瀉葉溶液灌胃，制造脾虛證模型，待成功后，再控制飲食，給予模型動(dòng)物間斷性喂食的方法制備便秘模型。
胃潰瘍脾虛證模型
胃潰瘍脾虛證模型多用大鼠，采取大黃苦寒瀉下法建立脾虛動(dòng)物模型脾虛造模成功后，灌胃無水乙醇刺激胃黏膜造成胃潰瘍。
潰瘍性結(jié)腸炎脾虛證模型
潰瘍性結(jié)腸炎脾虛證模型在造模方法上主要選用病因模擬法先復(fù)制脾虛證，如番瀉葉浸泡液灌胃，后選用化學(xué)制劑或免疫制劑誘導(dǎo)疾病模型的造模方法，所選化學(xué)試劑以5%葡聚糖硫酸鈉（DSS）自由飲用或2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）加50%乙醇混合試劑灌腸為主。
在病證模型研究中，疾病的造模方法多有業(yè)界標(biāo)準(zhǔn)和共識(shí)，而以“脾虛”和“標(biāo)準(zhǔn)”/“共識(shí)”進(jìn)行檢索，結(jié)果皆為臨床診療共識(shí)，缺乏脾虛證模型行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和共識(shí)。譬如，雖有廣為使用的造模方法，但造模時(shí)間則是因人而異，由于動(dòng)物對(duì)造模因素有耐受表現(xiàn)，同一指標(biāo)在不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)水平不一，進(jìn)而導(dǎo)致同行間數(shù)據(jù)偏差，難以保證模型的重復(fù)性，無法形成統(tǒng)一結(jié)論。脾虛證型造模方法繁多，涉及復(fù)雜生理系統(tǒng)，評(píng)價(jià)指標(biāo)多樣，模型中醫(yī)證型指標(biāo)皆為類比脾虛患者而來，亟需學(xué)界專家達(dá)成涉及造模方法、評(píng)價(jià)指標(biāo)的共識(shí)，以標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范發(fā)展。評(píng)價(jià)指標(biāo)多從中醫(yī)“脾”的功能和特性類比相應(yīng)生化指標(biāo)，涉及脾主運(yùn)化、脾主統(tǒng)血、脾在體合肉主四肢、脾在志為思、脾在液為涎等方面。但在具體研究中評(píng)價(jià)指標(biāo)缺乏系統(tǒng)性和整體性，各研究常以單一或少數(shù)指標(biāo)作為依據(jù)，易造成評(píng)價(jià)的偏差。由此造成模型的不標(biāo)準(zhǔn)，或者說沒有標(biāo)準(zhǔn)化，但見一“證”便是，也因此造模方法層出不窮，難以出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化的模型，兩者互相掣肘。當(dāng)然也有學(xué)者在系統(tǒng)性和整體性進(jìn)行了有益探索，如陳婉珍等[53]基于代謝組學(xué)技術(shù)的脾虛證研究。中醫(yī)經(jīng)典藏象理論中，脾的生理機(jī)能、生理特性與形、竅、志、液、時(shí)通過精氣陰陽、水谷精微統(tǒng)一起來。而現(xiàn)代科學(xué)背景下的脾虛理論研究龐雜而細(xì)分，需要綱舉目張，統(tǒng)一理論，各類組學(xué)技術(shù)符合中醫(yī)整體觀念，人工智能的突破或許可以幫助梳理理論網(wǎng)絡(luò)，應(yīng)該積極擁抱前沿技術(shù)，服務(wù)于學(xué)術(shù)研究。
綜上所述，脾虛證模型亟需達(dá)成涉及造模方法、評(píng)價(jià)指標(biāo)的學(xué)界共識(shí)，系統(tǒng)性和整體性地用指標(biāo)評(píng)價(jià)模型，并運(yùn)用前沿技術(shù)闡釋大統(tǒng)一的現(xiàn)代脾虛理論。
Source: 世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化. 2024, 26 (03)，脾虛證動(dòng)物模型研究述評(píng)
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