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美鳳力臨床前大動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心
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膿毒癥被定義為由宿主對(duì)感染反應(yīng)失調(diào)引起的危及生命的器官功能障礙。膿毒癥的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，其中膿毒癥引起的全身促炎反應(yīng)是導(dǎo)致器官衰竭和死亡的關(guān)鍵因素之一。近年研究發(fā)現(xiàn)，多種腸道菌群參與膿毒癥疾病的發(fā)生和進(jìn)展。嗜黏蛋白阿克曼菌（Akkermansia muciniphila, AKK) 被認(rèn)為是一種功能性益生菌菌株，對(duì)許多疾病的進(jìn)展具有保護(hù)作用；然而，AKK是否參與膿毒癥的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。 2023年8月，南方醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院陳鵬、姜勇團(tuán)隊(duì)、珠江醫(yī)院周宏偉團(tuán)隊(duì)及中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)段屹團(tuán)隊(duì)共同在《Gut》（IF=24.5）在線(xiàn)發(fā)表題為“Novel tripeptide RKH derived from Akkermansia muciniphila protects against lethal sepsis”的研究論文。此研究發(fā)現(xiàn)AKK菌能夠產(chǎn)生一種新型三肽RKH，可能作為一種新的內(nèi)源性TLR4拮抗劑，預(yù)防致死性膿毒癥。在成功地將其療效轉(zhuǎn)化為臨床實(shí)踐后，RKH可能作為一種新的潛在治療方法來(lái)對(duì)抗致命性膿毒癥。該研究拓展了AKK的病理生理功能，為臨床治療致死性膿毒癥提供了一種新的潛在治療方法。 圖片來(lái)源：《Gut》 （https://gut.bmj.com/content/early/2023/08/11/gutjnl-2023-329996.long） 研究材料 小鼠：雄性C57BL/6小鼠，無(wú)菌（germ free）小鼠（賽業(yè)生物提供），TLR4-/-小鼠； 豬：巴馬豬； 細(xì)胞：小鼠骨髓來(lái)源的巨噬細(xì)胞（BMDMs），THP-1細(xì)胞，病人外周血誘導(dǎo)分化的巨噬細(xì)胞等。 研究材料 測(cè)序技術(shù)：16S-rRNA測(cè)序，2b-RAD-M測(cè)序，高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，非靶向代謝組學(xué)檢測(cè)技術(shù)； 常規(guī)實(shí)驗(yàn)技術(shù)：qRT-PCR，蛋白免疫印跡，組織HE染色，ELISA，血清損傷指標(biāo)檢測(cè)，流式細(xì)胞分選及分析技術(shù)，DNA凝膠電泳技術(shù)等； 其他技術(shù)：靶向定量技術(shù)，分子對(duì)接，表面等離子共振技術(shù)，酶解和熱穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)，免疫共沉淀等。 技術(shù)路線(xiàn) 01 AKK和膿毒癥關(guān)聯(lián)的研究：膿毒癥患者和膿毒癥小鼠的腸道AKK豐度均下降，提示AKK水平與膿毒癥相關(guān)，且僅依賴(lài)于活A(yù)KK 02 AKK改善膿毒癥的有效成分分析：活A(yù)KK產(chǎn)生新型三肽RKH參與膿毒癥預(yù)防，RKH處理可以預(yù)防膿毒癥小鼠致命性膿毒癥的發(fā)生 03 RKH預(yù)防膿毒癥機(jī)制的挖掘：RKH通過(guò)靶向結(jié)合TLR4并阻止TLR4激活，來(lái)預(yù)防膿毒癥引起的全身炎癥而發(fā)揮作用 04 RKH治療膿毒癥的臨床轉(zhuǎn)化探索：RKH降低膿毒癥巴馬豬模型死亡率、減輕全身炎癥和器官損傷，并負(fù)向調(diào)節(jié)膿毒癥患者來(lái)源巨噬細(xì)胞的促炎活性. 研究結(jié)果 1.腸道AKK菌參與人類(lèi)和小鼠膿毒癥進(jìn)展 首先，研究人員對(duì)假手術(shù)和盲腸結(jié)扎穿刺法（CLP）構(gòu)建的膿毒癥小鼠的糞便進(jìn)行了2bRAD-M測(cè)序，以探索腸道微生物群與膿毒癥發(fā)生和發(fā)展之間的潛在聯(lián)系。 在種水平上，與假手術(shù)組相比，CLP組的糞便中AKK豐度降低（圖1 A），隨后熒光定量PCR檢測(cè)中小鼠糞便中AKK的相對(duì)豐度也驗(yàn)證這一發(fā)現(xiàn)（圖1 B）。重要的是，與小鼠模型一致，如圖1 C所示，61份膿毒癥患者糞便樣本的AKK豐度明顯低于27份對(duì)照樣本。為了闡明AKK在膿毒癥進(jìn)展中的作用，作者將高AKK和低AKK兩組人類(lèi)糞便移植到受體小鼠中并進(jìn)行CLP手術(shù)。有趣的是，接受高AKK豐度糞便的小鼠的存活時(shí)間往往略高于接受低AKK的小鼠（圖1 E），盡管其他細(xì)菌也可能參與膿毒癥的進(jìn)展，但這些數(shù)據(jù)表明，AKK細(xì)菌至少在一定程度上發(fā)揮了保護(hù)作用。因此，腸道AKK水平可能參與膿毒癥的進(jìn)展。 2.活A(yù)KK能夠保護(hù)致死性膿毒癥小鼠 接下來(lái)，為了確定AKK對(duì)膿毒癥的直接影響，作者用PBS、活A(yù)KK或死AKK處理小鼠，然后進(jìn)行假手術(shù)或CLP手術(shù)。圖1 F-H提示，活A(yù)KK，而不?
